在固相標(biāo)記免疫測定中，非特異性吸附是指將抗原/抗體結(jié)合在固相載體上的過程中，固相載體表面不能被抗體/抗原完全覆蓋，操作中過程中加入的血清標(biāo)本以及酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會部分的吸附于固相載體表面，這種吸附無特異性（檢測時抗原抗體的結(jié)合是特異的），所以稱之為非特異性吸附。

    在ELISA中，非特異性吸附是值得注意的問題，如果抗原或抗體純化不過關(guān)，產(chǎn)生非特異性吸附是實驗操作中無法避免的。但是，即使抗原抗體的純化達(dá)到一定水平，還是有可能產(chǎn)生非特異性吸附。例如塑料載體表面的吸附，為了避免非特異性顯色，需用含Tween20的PBS或生理鹽水作為洗脫液，吐溫（Tween）就是指聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常作為助溶劑。根據(jù)它與聚合物所結(jié)合的脂肪酸種類不同而進行吐溫編號，結(jié)合月桂酸的為吐溫20，結(jié)合棕櫚酸的為溫40，結(jié)合硬脂酸的為吐溫60，結(jié)合油酸的為吐溫80。在免疫酶技術(shù)中常用含吐溫20的PBS作洗滌劑或作稀釋樣品和酶標(biāo)抗體（抗原）之用，它的洗滌效果要比牛血清蛋白溶液（0.5%）好，具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結(jié)合的作用。吐溫20的使用量一般在0.06%-0.1%.有學(xué)者認(rèn)為，Tween20還有增強特異性反應(yīng)的作用。另外，檢測血清和酶標(biāo)記抗體用含0.5%-1%牛血清白蛋白（或0.1%白明膠）稀釋也能得到增強特異性吸附的作用。樣品首先用稀釋的健血清孵育，也有助于去除非特異性顯色。除此之外，反應(yīng)的時間和掌握反應(yīng)劑最適濃度，也有助于克服非特異性吸附。反應(yīng)一般需4~5h（25℃），如要減少反應(yīng)時間則可升至37℃，雖然反應(yīng)溫度為37℃時對靈敏性和準(zhǔn)確性稍有影響，但是減少了保溫時間（需2~3h），對結(jié)果影響并不大，因此，37℃被經(jīng)常采用。酶標(biāo)記抗體的濃度太高，易出現(xiàn)假陽性；太低，則不靈敏。所用待測樣品、酶標(biāo)記抗體和抗抗體的最適濃度，通過實驗才能獲得。